国药中生武招字第（2017）057号
招标内容：武汉生物制品研究所有限责任公司脊髓灰质炎（sabin株）单克隆抗体制备服务
1.目的
课题《sIPV的II型病毒抗原定量检测试剂盒研制》需要订制一株能够区分识别sIPV的I型、II型、III型病毒的C抗原和D抗原的单克隆抗体（最好抗体具有中和活性）.
2.范围
仅用于武汉生物制品研究所有限责任公司sIPV的II型病毒D抗原单克隆抗体订制服务。
3.内容
3.1合格的投标人必须具备以下条件：
3.1.1、符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定的供应商。
3.2、具有病毒类疫苗单抗制作经验
3.2.1公司单抗制备需有5年以上单抗制备经验
3.2.2项目负责人需具备5年以上抗体药物研发管理经历
3.2.3 抗体药物研发团队不少于30人
3.2.4 具有抗体高通量自动化筛选平台
4、其他资质要求：
4.1本次招标不接受联合投标。
4.2本项目面向大、中、小等各类供应商采购，但不接受转包公司提供的服务。
4.3具有合法经营资质和认证认可资质。
4.4近3年无缴纳税收和社会保障资金的不良记录，有良好的商业信誉和较强的经济能力。
4.5具有完善的质量管理体系及突发事件应急预案。
5、项目概况：
5.1、项目名称：武汉生物制品研究所脊髓灰质炎病毒（sabin株II型病毒）单克隆抗体制备服务
5.2、招标类型：脊髓灰质炎单抗定制合同，长期有效
5.3、项目主要流程、要求：
5.3.1服务流程：
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阶段 |
内容 |
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１．免疫程序(大约75天左右) |
Ｔ－１：预取血５-８只Balb/c纯系小鼠。
Ｔ＋０：初免，10-100ug（完全佐剂），皮下多点注射。
Ｔ＋21：加强１，10-100ug（非完全佐剂），皮下多点注射。
Ｔ＋42：加强２，10-100ug（非完全佐剂），皮下多点注射。
Ｔ＋52：试取血，ELISA检测滴度取滴度较高的小鼠。
Ｔ＋72：终加强，10-100ug（非完全佐剂），尾静脉注射。 |
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２．融合： |
免疫75天后（终免疫３天后）的鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合。 |
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３．筛选阳性细胞克隆：(大约10-20天) |
融合后10-20天，经2-3次筛选，包括自身抗原的阳性筛选和交叉抗原的阴性筛选。 |
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４．克隆化及检测：(大约10-20天) |
筛选后，两次亚克隆，同时进行检测。 |
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５．腹水方式制备单克隆抗体：(10-20天) |
选取多株，分别免疫两只BALB/c小鼠提取2ml以上腹水。 |
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６．抗体纯化：(大约7天) |
腹水经辛酸和硫酸铵两步纯化。 |
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说明: |
1: 免疫5－8只 Balb/c纯系小鼠。
2:选取高滴度免疫小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
3: 提供尽可能多的细胞克隆，并保证至少有3株是针对目的抗原的细胞株，但不能保证你们用该株细胞的抗体的后续开发的结果。
4: 提供多株（至少3株）单克隆细胞上清≥1ml/株，腹水≥2 ml/株。
5: 腹水纯化后抗体ELISA效价≥1：20，000。
6:客户提供抗原,抗原纯度90%以上。
7: 所有的细胞株（包括特异及非特异的细胞株） 及抗体的知识产权归武汉生物制片研究所所有。
9:所有研究过程中产生的细胞株、抗体及文件要交付武汉生物制品研究所有限责任公司。
10; 其他事宜,双方进行协商。 |
5.3.2具体杂交瘤细胞的筛选，亚克隆及鉴定的要求：
5.3.2.1杂交瘤细胞的筛选和亚克隆的要求
加 HAT 培养基于 96 孔板培养 。融合后细胞长满 1 3 ～ 2 3 孔时 ,取培养上清采用间接ELISA 法，间接免疫荧光法 2 种方法对杂交瘤细胞进行筛选（直接用 Elisa（铺4块板子）先区分D和C ，再用间接免疫荧光法筛选），检测其与 D 、C 抗原的反应性,选取与 D 抗原反应而与 C 抗原不反应的阳性孔杂交瘤细胞孔，并采用有限稀释法对细胞进行 3 次亚克隆。
进一步以 Balb c 小鼠腹腔巨噬细胞为饲养细胞进行亚克隆。经过至少 3 次有限稀释获得均一阳性克隆。将克隆纯化的杂交瘤细胞扩大培养,调整细胞数 1 ×106 ～ 2 ×106/ mL, 取 1 mL 细胞悬液注入经液体石蜡预处理 2 周的 Balb/c 小鼠腹腔内,收集腹水, -20 ℃保存。
5.3.2.2鉴定的要求
5.3.2.2.1腹水的鉴定
腹水抗体效价检测 ELISA 测得抗体效价，中和抗体效价，抗体亚型和蛋白总质量浓度。
腹水特异性鉴定 腹水抗体与Ⅱ型Sabin 株C 抗原和 Ⅰ 、Ⅲ型 Sabin 株病毒 C、D 抗原不发生交叉反应
5.3.2.2.2抗体的鉴定
间接 ELISA 法和微量中和实验检测抗体效价；用Ⅰ型、Ⅱ型 、Ⅲ型 Sabin 株抗体包被 , 加 Sabin IPV 抗原(Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ型 D 抗原 ,Ⅱ型C 抗原),进行 ELISA 检测抗原抗体反应性; 秋水仙素阻抑法分析杂交瘤细胞染色体; ELISA检测抗体亚型; BCA 法测量蛋白含量。
5.3.3 最终得到单抗的要求
最后得到单克隆抗体 ,只与脊灰病毒Ⅱ型 Sabin 株 D 抗原发生反应, 与脊灰病毒 Ⅱ型Sabin 株 C 抗原 , Ⅰ型 Sabin 株 D 抗原和C抗原 , Ⅲ型 Pfizer 株D 抗原和C抗原无交叉反应
5.4.融合后的筛选，武汉生物制品研究所有限责任公司可以派人员参与。
5.5.交付日期
项目签订后4个月内完成交付达到要求的单克隆抗体。
5.6．单克隆抗体细胞株及抗体知识产权属于武汉生物制品研究所有限责任公司
6.1报名截止日期：2017年06月09 日下午3:30时
6.2报名资质：投标人持公司营业执照（副本）、行业许可证、法人委托书、代理人身份证前来报名。
6.3此项目评标标准是以低价优先原则做为商务部分评选基础，通过评委综合评选后确定中标推荐人。
6.4投标书需准备3份，一正二副，所有投标方制作标书中必须加入反商业贿赂承诺书。否则视为无效标书。
反商业贿赂承诺书.doc
7.发布人名称：武汉生物制品研究所有限责任公司
7.1联系地址：武汉市江夏区黄金工业园路一号
7.2联系人：吴德鑫 汪 洋
联系电话：027-86637028
报名邮箱：wangyang16@sinopharm.com